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https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/9685
Tipo do documento: | Tese |
Título: | Otimização da técnica da Nested-PCR e genotipagem de Giardia intestinalis em caprinos de exploração leiteira |
Otros títulos: | Standardization of Nested-PCR technique and genotyping of Giardia intestinalis from dairy goats |
Autor: | Sudré, Adriana Pittella |
Orientador(a): | Bomfim, Teresa Cristina Bergamo do |
Primeiro membro da banca: | Figueiredo, Beatriz Brener |
Segundo membro da banca: | Carneiro, Helena Lúcia |
Terceiro membro da banca: | Santos, Huarrisson Azevedo |
Quarto membro da banca: | Silva, Valmir Laurentino |
Palabras clave: | Giardia intestinalis;caracterização molecular;caprino;goat;Giardia intestinalis;molecular characterization |
Área(s) do CNPq: | Medicina Veterinária |
Idioma: | por |
Fecha de publicación: | 12-dic-2012 |
Editorial: | Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro |
Sigla da instituição: | UFRRJ |
Departamento: | Instituto de Veterinária |
Programa: | Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias |
Citación: | Sudré, Adriana Pittella. Otimização da técnica da Nested-PCR e genotipagem de Giardia intestinalis em caprinos de exploração leiteira. 2012. 108 f. Tese (Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias) - Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica. |
Resumen: | A infecção por Giardia intestinalis assume destaque em caprinos jovens com aptidão leiteira, pelo fato de ser uma protozoose debilitante, além de representar um risco de contaminação ambiental por formas infectantes, as quais se disseminam facilmente. Este estudo teve como objetivos: (1) estabelecer a ocorrência de Giardia intestinalis em amostras fecais de caprinos, provenientes de duas caprinoculturas (A e B) localizadas no estado do Rio de Janeiro, Brasil, através do diagnóstico parasitológico de fezes; (2) otimizar as melhores condições de reação da Nested-PCR para detecção de Giardia sp. utilizando-se os genes alvo -giardina, tpi e gdh; e (3) caracterizar o(s) genótipo (s) de Giardia intestinalis obtidos de amostras fecais positivas através de sequenciamento e análises genéticas, comparando as sequências obtidas com aquelas depositadas no GenBank. Foram coletadas amostras fecais de todos os animais jovens (até um ano de idade) (n=58) e de 10% dos animais adultos (n=18). As amostras foram coletadas diretamente do reto e submetidas à técnica de centrífugo-flutuação em solução saturada de açúcar para pesquisa de cistos de Giardia intestinalis por microscopia, com posterior caracterização molecular das amostras positivas. Das 76 amostras analisadas, 17 (22,4%) foram positivas para cistos de Giardia intestinalis, sendo todas provenientes de animais jovens da caprinocultura A. Também foram coletadas amostras de fezes caninas (n=9) da propriedade A, para avaliação do papel destes no ciclo de transmissão. Três (33,3%) amostras caninas foram positivas para cistos de Giardia. As amostras positivas foram submetidas às técnicas de PCR-Nested e sequenciamento utilizando-se os genes-alvo β-giardina, gdh e tpi. A otimização dos métodos moleculares permitiu uma melhor obtenção de fragmentos de DNA, os quais possibilitaram a genotipagem de 8/17 amostras obtidas. Foi encontrando apenas o genótipo E nos isolados, os quais apresentaram heterogeneidade nas sequências obtidas, com números variados de polimorfismo de nucleotídeo único. O presente estudo foi o primeiro a realizar a caracterização molecular de Giardia intestinalis proveniente de amostras de caprinos no Brasil, contribuindo para traçar a epidemiologia molecular deste parasito no país. |
Abstract: | Giardia intestinalis infection is important in young dairy goats because it is a wasting protozoosis that compromises animal growth, and there is a risk of environmental contamination by infectious forms that are easily widespread. The aim of this study were: (1) establish the occurrence of Giardia intestinalis in goat fecal samples from two dairy farms (A and B) located in Rio de Janeiro state, Brazil, by fecal parasitological diagnosis; (2) standardize Nested-PCR to improve Giardia sp. detection using β-giardin, tpi and gdh gene targets; and (3) genotype Giardia intestinalis from positive fecal samples by means of sequencing and genetic analysis, comparing obtained sequences with those retrieved from Genbank. Fecal samples from all young animals (up to one year of age) (n=58) and from 10% of adult animals (n=18) were collected. Samples were collected directly from the rectum and were submitted to centrifuge-flotation in sugar saturate solution for microscopic search of Giardia intestinalis cysts, with further molecular characterization of positive samples. From 76 analyzed samples, 17 (22.4%) were positive for Giardia intestinalis cysts. All positive samples came from young animals of farm A. Also, dog fecal samples (n=9) were collected to evaluate their role in parasite transmission. Three dog samples (33.3%) were positive for Giardia intestinalis cysts. Positive samples were submitted to Nested-PCR and sequencing using β-giardin, gdh and tpi gene targets. The standardization of molecular methods improved the yeld of DNA fragments, allowing genotyping of 8/17 samples. Only genotype E was observed in isolates from this study, wich presented sequence heterogeneity, with variable numbers of single nucleotide polimorfisms. The present study report the first molecular characterization of Giardia intestinalis from goat samples in Brazil, contributing to a better knowlodge of the molecular epidemiology of this parasite in the country. |
URI: | https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/9685 |
Aparece en las colecciones: | Doutorado em Ciências Veterinárias |
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