Otimização da técnica da Nested-PCR e genotipagem de Giardia intestinalis em caprinos de exploração leiteira

Abstract

A infecção por Giardia intestinalis assume destaque em caprinos jovens com aptidão leiteira, pelo fato de ser uma protozoose debilitante, além de representar um risco de contaminação ambiental por formas infectantes, as quais se disseminam facilmente. Este estudo teve como objetivos: (1) estabelecer a ocorrência de Giardia intestinalis em amostras fecais de caprinos, provenientes de duas caprinoculturas (A e B) localizadas no estado do Rio de Janeiro, Brasil, através do diagnóstico parasitológico de fezes; (2) otimizar as melhores condições de reação da Nested-PCR para detecção de Giardia sp. utilizando-se os genes alvo -giardina, tpi e gdh; e (3) caracterizar o(s) genótipo (s) de Giardia intestinalis obtidos de amostras fecais positivas através de sequenciamento e análises genéticas, comparando as sequências obtidas com aquelas depositadas no GenBank. Foram coletadas amostras fecais de todos os animais jovens (até um ano de idade) (n=58) e de 10% dos animais adultos (n=18). As amostras foram coletadas diretamente do reto e submetidas à técnica de centrífugo-flutuação em solução saturada de açúcar para pesquisa de cistos de Giardia intestinalis por microscopia, com posterior caracterização molecular das amostras positivas. Das 76 amostras analisadas, 17 (22,4%) foram positivas para cistos de Giardia intestinalis, sendo todas provenientes de animais jovens da caprinocultura A. Também foram coletadas amostras de fezes caninas (n=9) da propriedade A, para avaliação do papel destes no ciclo de transmissão. Três (33,3%) amostras caninas foram positivas para cistos de Giardia. As amostras positivas foram submetidas às técnicas de PCR-Nested e sequenciamento utilizando-se os genes-alvo β-giardina, gdh e tpi. A otimização dos métodos moleculares permitiu uma melhor obtenção de fragmentos de DNA, os quais possibilitaram a genotipagem de 8/17 amostras obtidas. Foi encontrando apenas o genótipo E nos isolados, os quais apresentaram heterogeneidade nas sequências obtidas, com números variados de polimorfismo de nucleotídeo único. O presente estudo foi o primeiro a realizar a caracterização molecular de Giardia intestinalis proveniente de amostras de caprinos no Brasil, contribuindo para traçar a epidemiologia molecular deste parasito no país.