Adequação e apresentação de parâmetros de validação intralaboratorial de um ensaio para a quantificação de Aflatoxinas em Castanha-do-brasil (Bertholletia excelsa Bonpl.) através de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência

Abstract

As aflatoxinas são metabólitos secundários produzidos por fungos do gênero Aspergillus, sobretudo Aspergillus flavus e Aspergillus parasiticus. São conhecidos, atualmente, 17 compostos similares designados pelo termo aflatoxinas, porém, os principais tipos de interesse médico-sanitário são identificados como AFB1, AFB2, AFG1 e AFG2. Devido ao potencial risco à saúde humana, os níveis de aflatoxinas são monitorados em muitos países. Mais de 50 países já estabeleceram níveis máximos de contaminação em alimentos e rações animais. Portanto, para o controle e monitoramento eficientes dos alimentos susceptíveis à contaminação são necessárias técnicas analíticas com sensibilidade, especificidade, rapidez, facilidade de uso, exatidão e precisão. No presente trabalho foi realizada a adequação de um ensaio analítico constituído por uma extração baseada no método preconizado por RODRIGUEZ AMAYA e VALENTE SOARES (1989), seguida de quantificação por CLAE, para a determinação das aflatoxinas AFB1, AFB2, AFG1 e AFG2, em amostras de castanha-do-brasil fortificadas. As amostras foram contaminadas com 5,3 mg×kg-1 de AFG1; 6,9 mg×kg-1 de AFB1; 4,8 mg×kg-1 de AFG2 e 5,0 mg×kg-1 de AFB2. Foram determinados os seguintes parâmetros de validação encontrados para o ensaio desenvolvido: Seletividade, Recuperação, Linearidade da Curva de Calibração, Limite de Detecção, Limite de Quantificação, Efeito de Matriz, Robustez e Precisão, através do Desvio Padrão Relativo (DPR). Realizou-se também a comparação de métodos de extração e de quantificação das aflatoxinas AFB1, AFB2, AFG1 e AFG2 usando Cromatografia em Camada Delgada (CCD) e Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Foi feita análise de variância de Tukey a 5% de significância entre os 4 métodos testados e calculada a recuperação dos mesmos. Os valores de recuperação para AFG1, AFB1, AFG2 e AFB2 foram de 101,89; 100,25; 86,63 e 93,42%, respectivamente. A metodologia constituída por extração pelo método modificado baseado no método preconizado por RODRIGUEZ AMAYA e VALENTE SOARES (1989), seguida de quantificação por CLAE, foi aquela que mostrou melhores resultados de recuperação, revelando-se estatisticamente melhor que as demais metodologias testadas. A curva de calibração apresentou coeficientes de correlação variando entre 0,9936 e 0,9997, confirmando a sua linearidade, o Limite de Detecção determinado foi de 0,263;0,345; 0,241 e 0,254mg/×kg-1 de amostra para AFB1, AFB2, AFG1 e AFG2, respectivamente.