Análise da atividade leishmanicida do derivado sintético da piperina e do efeito imunomodulatório do composto sintético e de compostos naturais em linhagens de macrófagos murinos e canino

Abstract

Os macrófagos são células fagocíticas presentes em diversos órgãos envolvidos na homeostase e proteção dos tecidos. Os macrófagos são as células hospedeiras do parasito Leishamania sp. agente causador da leishmaniose que aflige 1 milhão de pessoas anualmente. Os medicamentos são tóxicos e extremamente caros. Produtos naturais apresentam ação farmacológica com fácil acesso e na maioria seguros, além de apresentarem estruturas químicas que permitem modificações para seu aperfeiçoamento. Nosso grupo demonstrou anteriormente que 2 produtos naturais, (-)-Guaiol e Piperina (AF1) apresentam atividade leishmanicida para espécies de Leishmania amazonensis. Nesse trabalho confirmamos essa ação dos compostos naturais e estudamos pela primeira vez a atividade antileishmania do derivado sintético de piperina N4-cyclohexyl-1,2,4- triazol-3-thione (AF2). Avaliamos também a ação imunomoduladora dos compostos em diferentes linhagens celulares de macrófagos murinos P388D1 e RAW 264.7 e canino DH82. Os compostos demonstraram uma atividade leishmanicida in vitro para promastigotas de L. amazonensis com IC50 de 56.24 μM, 9.36 μM e 8.73 μM para (-)- Guaiol, AF1 e AF2, respectivamente. As linhagens celulares apresentaram viabilidade acima de 70% após tratamentos com os compostos. AF2 na concentração de 50 μM diminuiu a atividade fagocítica de DH82 após desafio com formas promastigotas. Os tratamentos com os compostos levaram a modulação na produção de NO e ROS e alterou a expressão de moléculas MHC I/II, CD80 e CD86 nas diferentes linhagens. Por fim, resultados de qPCR demonstram que linhagem RAW 264.7 e DH82 aumentam a expressão de mRNA da citocina IL 10 após tratamento com (-)-Guaiol e AF1 enquanto que os compostos diminuem a expressão de IL 10, IL 12, TLR4 e TLR9 nessas células quando estimuladas com LPS. A linhagem celular P388D1 em repouso e tratadas com (- )-Guaiol e AF1 levaram a uma redução da expressão de TLR4. Os resultados sugerem que o efeito dos compostos pode ser diferente dependendo do tipo celular.